当归挥发油对大鼠十二指肠慢波肌电活动的作用讨论论文
当归挥发油为常用中药当归的主要有效组分之一。研究表明，当归挥发油含有藁本内酯、正丁烯基苯酞内酯等多种成分。近年来本课题组研究表明，当归挥发油对机体平滑肌具有广泛的药理活性，且认为当归挥发油可能在防治胃肠道平滑肌动力紊乱性疾病方面具有重要的应用价值。本研究采用生物信号采集分析系统，观察当归挥发油对大鼠十二指肠肌电活动的影响，从电生理角度分析当归挥发油对肠平滑肌作用的特点和规律，为进一步开发当归的药用价值提供实验依据。
1 材料和方法
1. 1 试验药物当归挥发油，岷县康达药业开发有限责任公司提供( 取生当归饮片1kg，置于5L 超临界萃取设备进行CO2超临界流体萃取，萃取压力为25MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为6 小时、CO2流量为2L/kg·h，当归萃取液过滤，滤液静置，取油层，得8. 2g 挥发油，当归挥发油含量为0. 82g /100g 药材，所得当归挥发油经GC-MS 分析，藁本内酯含量为81. 4%。) ，实验时用0. 1%泊洛沙姆-127 配制0. 4%、0. 2%、0. 1% 的当归挥发油乳状液。盐酸多巴胺注射液( 江苏亚邦强生药业有限公司，批号130316) ; 多潘立酮片( 西安杨森制药有限公司，批号130410523) ; 甲硫酸新斯的明注射液( 浙江仙琚制药股份有限公司，批号120301) ; 硫酸阿托品注射液( 天津金耀氨基酸有限公司，批号1207071) ，盐酸维拉帕米( 上海信谊药厂有限公司，批号120601) ; 氯化钡( 天津市光复科技发展有限公司，XK 13-201-00520) 。
1. 2 动物Wistar 大鼠，雌雄兼用，体质量180 ～ 220g，SPF 级，由甘肃中医学院实验动物中心提供，合格证编号: SCXK( 甘)2011-0001，SPF 级饲料( 由北京科奥协力饲料有限公司供给) 喂养，自由饮水，适应性饲养3 天后进行实验。
1. 3 试剂泊洛沙姆( 上海源叶生物科技有限公司，批号2014 /12) 。
1. 4 仪器BL-420F 生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司; 动物恒温手术台ST-1 型。
1. 5 方法取大鼠，禁食不禁水18 h， 10% 水合氯醛( 0. 33ml /100g) 腹腔注射麻醉，仰位固定，腹部备皮，常规消毒，剑突下正中做3 ～ 5cm 切口，暴露胃及小肠。自幽门向下将针状电极从十二指肠( 幽门下2 cm 处) 垂直纵行肌刺入浆膜下2mm 肌层固定( 电极直径0. 3 mm，电极间距离约0. 3cm) ，参考电极夹于皮下，电极输入端与BL-420F 生物机能实验系统相连接。设置参数即可进行信号的采集，记录过程中在肠管上方覆盖温生理盐水纱布，同时控制室温在25℃。根据预实验，BL-420F 生物机能实验系统的采集参数设置为: 增益500μV，时间常数0. 3s，滤波50Hz，扫描速度500ms /div，50Hz 限波开启，以SWMF 和SWMA 作为主要统计指标，以5min 为时间段，记录慢波肌电图，计算平均SWMF 和SWMA。
2 结果
2. 1 当归挥发油对正常大鼠十二指肠慢波肌电的影响取大鼠24 只，随机分为4 组，设正常对照组和当归挥发油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 剂量组，每组6 只，按上述方法建立测试系统，观察记录各组大鼠十二指肠慢波肌电波形，待稳定后，记录给药前5min 内慢波肌电图; 当归挥发油三种剂量组大鼠分别尾静脉注射0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 的当归挥发油乳浊液10ml /kg，正常对照组给予0. 1%泊洛沙姆生理盐水溶液10ml /kg。分别记录给药后第10、20、40、60min 起始5min 内慢波肌电图，计算平均SWMF 和SWMA。结果显示，不同剂量的当归挥发油对正常大鼠十二指肠SWMF 和SWMA 的影响不明显，给药后60min 内，与正常对照组比较，组间差异均无统计学意义。
2. 2 当归挥发油对多潘立酮诱导的大鼠十二指肠肌电的影响取大鼠36 只，随机分为6 组，设正常对照组、模型对照组、多巴胺对照组和当归挥发油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg三个剂量组，每组6 只，按上述方法建立测试系统，观察记录各组大鼠十二指肠慢波肌电波形，待稳定后，除正常对照组大鼠灌胃10ml /kg 生理盐水外，其余各组大鼠灌胃3mg /kg 多潘立酮， 30min 后，记录5min 内慢波肌电作为给药前对照值。第40min，除正常对照组和模型对照组尾静脉注射0. 1% 泊洛沙姆生理盐水溶液10ml /kg 外，当归挥发油三个剂量组大鼠分别尾静脉注射0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 的当归挥发油乳浊液10ml /kg，多巴胺对照组肌内注射0. 02mg /kg 多巴胺注射液，分别记录第10、20、40、60min 起始5min 内大鼠十二指肠慢波肌电图，计算平均SWMF 和SWMA。
结果显示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠SWMF 加快，SWMA 明显增强; 与模型对照组比较，多巴胺对照组SWMF减慢、SWMA 减弱，0. 04mg /kg 和0. 02mg /kg 当归挥发油组SWMF 和SWMA 均减弱，0. 01mg /kg 当归挥发油组SWMF 加快，而SWMA 减弱。
2. 3 当归挥发油对新斯的明诱导的大鼠十二指肠肌电的影响分组、给药与测试方法同2. 2. 2，实验大鼠肌内注射0. 1mg /kg甲硫酸新斯的明建立肠功能亢进模型，对照组肌内注射1. 0mg /kg 硫酸阿托品，当归挥发油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg三个剂量组分别于给当归挥发油后记录第10、20、40、60min 起始5min 内大鼠十二指肠慢波肌电图，计算平均SWMF 和SWMA。结果显示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠SWMF 加快，SWMA 明显增强; 与模型对照组比较，硫酸阿托品对照组SWMF 减慢、SWMA 减弱，0. 04mg /kg 和0. 02mg /kg 当归挥发油组SWMF 和SWMA 均减弱，0. 01mg /kg 当归挥发油组SWMF 减慢。
2. 4 当归挥发油对氯化钡诱导大鼠十二指肠肌电的影响分组、给药与测试方法同2. 2. 2，实验大鼠腹腔注射0. 02mg /kgBaCl2建立肠功能亢进模型，对照组腹腔注射2. 4mg /kg 盐酸维拉帕米，当归挥发油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 剂量组分别于给当归挥发油后记录第10、20、40、60min 起始5min 内大鼠十二指肠慢波肌电图，计算平均SWMF 和SWMA。
3 讨论
十二指肠肌电活动的指标包括快波和慢波的振幅及频率，但在本实验的过程中，使用BL-420F 生物机能实验系统提供的区间测定方法，观察到快波在麻醉动物身上出现的时间集中在动物有苏醒迹象左右时，而其他时间段不易检测到，快波的出现受麻药的影响比较大，因此，在麻醉动物在体检测十二指肠肌电快波变化的可行性交差，本研究重点监测慢波频率和振幅的变化，探讨胃肠功能状态。现代研究认为，胃肠运动是一种非常复杂、精细且高度协调的活动，是消化系统最重要的生理功能之一，它要受神经和体液多种因素的共同调节，通过内分泌、旁分泌和神经分泌而行使功能。目前已发现的常见的引起平滑肌收缩的兴奋性神经递质和激素，如乙酰胆碱( Ach) 、P 物质( SP) 、胃动素( MTL) 、胃泌素( GAS) 等; 抑制性神经递质和激素，如一氧化氮( NO) 、血管活性肠肽( VIP) 、生长抑素( SS) 、神经降压肽( NT)等。而激素的作用依赖于相应的受体，研究发现的已参与调节胃肠道的受体主要包括5-HT 受体、组胺受体、胆碱能M 受体、多巴胺受体、肾上腺能受体( α 和βR) 以及多种胃肠激素受体。在调节过程中，不论是兴奋性神经递质的增多或减少还是抑制性神经递质的增多或减少，均会使两者原有的相对平衡遭到破坏，变成失衡状态，从而导致胃电节律的异常，影响胃肠平滑肌舒缩活动甚至出现紊乱而出现一系列的临床症状。
关于当归挥发油对胃肠平滑肌的影响，前期在体实验和离体实验研究均显示，对不同种属动物不同状态下的胃肠平滑肌都存在一定的调节作用，甚至当归不同炮制品的挥发油以及不同提取方法所得的挥发油也均可不同程度的影响胃肠功能及活动。本研究结果显示，当归挥发油对麻醉大鼠十二指肠慢波肌电频率和振幅均有影响，当归挥发油对多潘立酮、新斯的明和氯化钡诱导的大鼠十二指肠平滑肌慢波肌电频率的变化均呈现明显的拮抗作用，由此可以初步推断当归挥发油对胃肠平滑肌作用的靶部位有多巴胺受体、M 受体和钙离子通道。
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