双柏凝胶剂中大黄素测定实验论文

1 仪器与试药

1.1 仪器高效液相色谱仪（日本岛津）：LC-10ATvp双泵，SLC-10Avp控制器，SPD-10Avp紫外检测器，CTO-10ASvp柱温箱。

1.2 试药大黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号为0756-9908）；甲醇为色谱纯；大黄、黄柏、泽兰、侧柏叶、薄荷由柳州市神农中药饮片厂提供，经柳州市中医院药检室鉴定，符合《中国药典》要求；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 凝胶剂的制备取处方量的大黄（A）和根据双柏散处方比例称取药材粗粉（B），均加95%乙醇浸泡6 h，以5～7 ml/min的速度渗漉提取，相应渗漉液浓缩至约50 g，加入3 g 卡波姆940，密闭放置过夜使其充分溶胀，加蒸馏水至100 g，研匀即得。分装于密闭避光的容器中，贮存于凉处。A：大黄凝胶；B:双柏凝胶

2.2 建立测定方法

2.2.1 色谱条件

色谱柱为选Kromasil- C18 柱（5μm，250 mm×4.6 mm）；流动相为甲醇-水（6:4）；流速1.0 ml/min；检测波长254 nm；柱温30℃；进样量：10 μl。

2.2.2 对照品溶液制备

精密称取大黄素对照品5 mg，加甲醇溶解定容至25 ml，制成0.2 mg/ml的溶液，即可。

2.2.3 供试品溶液制备

精密称取凝胶剂1 g，水浴浓缩至近干，加蒸馏水10 ml，浓盐酸1 ml，沸水浴中水解30 min，再加氯仿20 ml，超声振荡20 min，置分液漏斗中分层，取氯仿层；水层用氯仿洗3次，每次10 ml，合并氯仿液，挥干。加适量甲醇溶解，转移至10 ml容量瓶中，超声振荡数分钟使溶解完全，加甲醇至刻度，摇匀。针孔式微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.4 线性关系

考察精密吸取对照品溶液用流动相稀释成0.4，1.0，2.0，4.0，10.0 μg·ml-1进样10 μl测定，以大黄素进样量（Y）和峰面积（X）进行线性回归，求得标准曲线的回归方程为：Y=3 300.3X-1 422，r=0.999 8。结果表明大黄素进样量在0.4～10 μg·ml-1范围内有良好的线性关系。

2.2.5 精密度实验

精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样测定5次，结果大黄素峰面积值的RSD=0.59%，表明仪器精密度良好。取供试品溶液，于0，1，2，3 h分别进样测定峰面积，结果RSD=0.42%。表明供试品在3 h内稳定。实验全部选择雄性昆明小鼠可便于取皮操作及结果数据的平行。同时以高效液相色谱法为离体鼠建立了可靠的体外测定方法，在渗透实验中，由于皮肤与介质长时间接触，皮肤中蛋白质等物质易脱落，溶解，会导致混浊或呈乳光，本文酸化样液以游离出脂溶性大黄素，然后氯仿提取，从而消除了皮肤中蛋白等成分对色谱柱的影响。

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